IS300的座椅设计能够完全贴合身体，采用绒面皮革包裹，兼顾了舒适型与运动性、前排座椅带有8方向电动调节，还能够调节腰部支撑。

前排空感觉非常紧凑，乘坐时有一种被“镶”在车里的感觉，让人很有安全感，而且坐姿比较低，有点跑车的味道。身高178cm的编辑头部有一拳距离，还可以接受。

后排座椅的舒适度不错，但是空间方面就没有多大优势了，同样身高178cm的编辑后排头部只有三指距离，而腿部有一拳距离，这样的后空间虽然完全够用，但是相对于其2730mm的轴距来说显得有些过于局促了，与竞争对手相比也出于劣势。

由于IS300采用了前置后驱的驱动方式，因此传动轴要从车头的发动机延伸到尾部的驱动轮，需要占据一部分车内空间，特别是后排的中部，基本就不能坐人了，而事实也证明，后排有限的乘坐空间乘坐两个人是最合适的，乘坐三个人会非常难受。而另一方面也突出了IS300高性能运动车型的定位，注重性能上的感受而忽略了空间方面的需求。